背景[1-3]
HCT 116(人结肠癌细胞)是一种人结肠癌细胞系,也被称为COL001或CCL-247。它是由美国国立癌症研究所(NCI)的科学家从一名51岁男性结肠癌患者的淋巴结中分离出来的。
HCT 116(人结肠癌细胞)具有许多特性,包括生长迅速、多态性、克隆形成能力和耐药性。这些特性使得它成为研究结肠癌发病机制、转移和治疗的重要工具。
HCT 116(人结肠癌细胞)在研究中被广泛应用,包括:
研究结肠癌的生物学特性:HCT 116(人结肠癌细胞)可以用于研究结肠癌细胞的生长、分化、凋亡和迁移等生物学特性。
研究转移:HCT 116(人结肠癌细胞)具有转移能力,可以用于研究结肠癌的转移机制和评估药物对转移的抑制作用。
药物筛选:HCT 116(人结肠癌细胞)常用于药物筛选,以评估抗癌药物或其他治疗方法对结肠癌的疗效。
研究信号通路:HCT 116(人结肠癌细胞)可以用于研究结肠癌相关的信号通路,如Wnt/β-连环蛋白通路、PI3K/Akt通路等。
需要注意的是,虽然HCT 116(人结肠癌细胞)在结肠癌研究中被广泛使用,但其特性可能与不同个体或肿瘤类型的结肠癌有所不同。因此,在具体实验中,还需要结合其他结肠癌细胞系和临床样本进行综合分析和评估。
HCT 116(人结肠癌细胞)
HCT 116(人结肠癌细胞)培养操作
1)复苏HCT 116(人结肠癌细胞):以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)HCT 116(人结肠癌细胞)传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3)HCT 116(人结肠癌细胞)冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
HCT 116(人结肠癌细胞)可以用于健脾消癌方配方颗粒及传统汤剂对结肠癌细胞HCT116作用的比较研究
比较健脾消癌方配方颗粒与传统汤剂对HCT 116(人结肠癌细胞)的增殖与凋亡的作用,以指导临床用药及为科研剂型选择提供依据。
方法:1:用0.625ug/μL、1.25ug/μL、2.5ug/μL、5ug/μL健脾消癌方配方颗粒及0.625ug/μL、1.25ug/μL、2.5ug/μL、5ug/μL健脾消癌方传统汤剂处理HCT 116(人结肠癌细胞)各作用24h、48h,进行细胞增殖毒性实验(Cell Counting Kit-8法)检测健脾消癌方配方颗粒与传统汤剂对HCT 116(人结肠癌细胞)的抑制作用,并进行对比。
2:用1.25ug/μL、2.5ug/μL健脾消癌方配方颗粒及1.25ug/μL、2.5ug/μL健脾消癌方传统汤剂处理HCT 116(人结肠癌细胞),使用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bax,Bcl-x L,Caspase-3蛋白表达量。
结果:1.健脾消癌方配方颗粒和传统汤剂作用后,均随着药物浓度升高而抑制率升高,出现浓度依赖性;作用24h、48h时,传统汤剂均在1.25ug/μL及2.5ug/μL两个浓度抑制率优于配方颗粒,P<0.05;配方颗粒剂型在2.5ug/μL及5.0ug/μL时,48小时作用效果显著优于24h作用效果;传统汤剂剂型在0.625ug/μL、1.25ug/μL及2.5ug/μL浓度出现48h作用下HCT 116(人结肠癌细胞)抑制率高于24h抑制率,P<0.05呈现较为明显的时间依赖性。
2. 健脾消癌方传统汤剂1.25ug/μL及2.5ug/μL组HCT 116(人结肠癌细胞)均上调Bax蛋白表达,P<0.05。
3. 配方颗粒2.5ug/μL组和传统汤剂1.25ug/μL及2.5ug/μL组HCT 116(人结肠癌细胞)均下调Bcl-x L蛋白表达,P<0.05;传统汤剂2.5ug/μL组较配方颗粒2.5ug/μL组下调明显,差异具有统计学意义(P<0.001);传统汤剂2.5ug/μL组优于传统汤剂1.25ug/μL,存在统计学意义(P<0.05)。
4. 健脾消癌方配方颗粒与传统汤剂各浓度有不同程度的Caspase-3蛋白表达下降,其中配方颗粒2.5ug/μL组、传统汤剂1.25ug/μL及2.5ug/μL组HCT 116(人结肠癌细胞)均较对照组下调,差异具有统计学意义(P<0.001);1.25ug/μL及2.5ug/μL浓度下,传统汤剂均较同等浓度配方颗粒组蛋白表达明显下降(P<0.001)。
结论:1.配方颗粒剂型与传统汤剂剂型健脾消癌方均能对HCT 116(人结肠癌细胞)起到生长抑制作用,且呈浓度和时间依赖性,其中传统汤剂的抑制生长效果在1.25ug/μL及2.5ug/μL浓度条件下较配方颗粒组显著。
2.健脾消癌方能够上调HCT 116(人结肠癌细胞)Bax及下调Bcl-xl、Caspase-3。尤其传统汤剂干预效果显著,健脾消癌方干预HCT116细胞的凋亡相关蛋白表达从而影响细胞凋亡过程。
3.体外实验的数据结果表明,传统汤剂剂型健脾消癌方在抑制HCT 116(人结肠癌细胞)生长及促进凋亡方面效果优于配方颗粒,差异具有统计学意义。
参考文献
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