背景及概述[1-2]
上皮细胞覆盖于身体表面并衬贴于体内空腔器官腔面的细胞。其排列有明显极性，一面朝向身体表面或腔面，称游离面；一面向着深部的结缔组织，称基底面。上皮细胞具有强大的角生和更新能力。上皮组织具有保护、吸收、分泌和排泄等作用。当上皮细胞受损时，则影响机体的防御功能。小鼠肺泡上皮细胞分离自肺组织；肺泡肺内最基本的呼吸单位，是气体交换的主要场所，是多面形的薄膜囊泡，一面与肺泡囊或肺泡管相通，其他各面与肺泡毛细血管网或相邻的肺泡相接。肺泡壁表面覆盖有肺泡上皮。肺泡之间有一薄层结缔组织，内含丰富的毛细血管网及大量的弹力纤维和巨噬细胞。肺泡壁上有小孔，称肺泡孔。肺泡与毛细血管间的隔膜称气血屏障，它十分菲薄，由毛细血管内皮、基底膜和肺泡上皮、基底膜及其间弹力纤维、胶原纤维等组成。肺泡细胞又叫粒性细胞、大肺泡细胞，系肺泡上皮细胞的一种。此种细胞分散在Ⅰ型细胞之间，只占肺泡上皮细胞的10%左右。此种细胞体积大，呈立方体，胞质呈泡沫状，内有卵圆形的由嗜锇物质构成的板层小体，此小体能分泌一种肺泡表面活性物质，此种物质由磷脂类、粘多糖、蛋白质及酶类组成，对细胞表面有活性作用，能降低肺泡表面张力、起稳定肺泡内压的作用。小鼠肺泡上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合灌注消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经SP-C免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
相关研究[3-5]
有实验探讨蓖麻毒素气源性中毒中的肺损伤机制。取BALB/c雌性小鼠，采用心脏灌注排血、胶原酶和胰蛋白酶原位消化法及组织块细胞迁出培养法，分离培养小鼠肺泡上皮细胞，经刮除法及差相消化贴壁法纯化小鼠肺泡上皮细胞，通过兔抗鼠角蛋白单克隆抗体细胞爬片组化染色法对细胞进行纯度鉴定；经不同终浓度的蓖麻毒素(0、0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、100μg/ml)处理细胞进行毒性分析；倒置显微镜下观察0.05μg/ml蓖麻毒素对细胞的毒性作用。结果获得的小鼠肺泡上皮细胞纯度达90%以上；随着蓖麻毒素浓度的增加，细胞活力降低，蓖麻毒素浓度与肺泡上皮细胞增殖抑制呈正相关；0.05μg/ml的蓖麻毒素即可引起细胞皱缩、空泡化变性。结论蓖麻毒素可引起原代培养肺泡上皮细胞变性损伤，损伤程度随蓖麻毒素浓度增高而加重，为蓖麻毒素气源性中毒中的肺损伤机制提供了理论依据，同时为进一步探讨蓖麻毒素的毒理作用提供了新的思路。
此外，还有研究探讨骨髓间充质干细胞条件培养基(BMSCs-CM)对小鼠肺泡上皮细胞增殖的影响及机制。方法分离与培养小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)，流式细胞仪检测细胞表面标记物示CD44阳性表达率为92.5%、CD34阴性表达率为97.3%，提示成功分离与培养BMSCs，且纯度较高。当第2代细胞融合70%~80%时，提取BMSCs-CM。将人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、无血清组、BMSCs组、BMSCs-CM组。对照组以含10%血清的DMEM/F12培养基培养，无血清组以无血清的DMEM/F12培养基培养，BMSCs组加入已接种小鼠BMSCs的Transwell用无血清的DMEM/F12培养基共培养，BMSCs-CM组以获取的小鼠BMSCs-CM培养。培养24h时，采用CCK-8法检测各组细胞相对存活率。将体外常规培养的肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)随机分为对照组、BMSCs-CM组，对照组以无血清的DMEM/F12培养基培养24h，BMSCs-CM组以获取的小鼠BMSCs-CM培养24h，采用RT-PCR法检测钠通道蛋白α(α-ENaC)相对表达量。结果无血清组细胞相对存活率为(80.70±0.70)%，BMSCs组为(85.83±1.98)%，BMSCs-CM组为(91.28±1.91)%，BMSCs组与BMSCs-CM组均高于无血清组(P<0.05或<0.01)。对照组α-ENaC相对表达量为1.00±0.00，BMSCs-CM组为3.16±1.50，两组比较P<0.05。因此BMSCs-CM可促进肺泡上皮细胞增殖，其作用机制可能与促进肺泡Ⅱ型细胞α-ENaC表达有关。
另外，还有实验探讨右美托咪定(DEX)在脓毒症小鼠肺泡上皮细胞炎性反应中的作用。方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为盲肠结扎穿孔(CLP)组和CLP+DEX组，每组36只。CLP组小鼠在CLP术前15min腹腔注射1mL无菌生理盐水，CLP+DEX组小鼠在CLP术前15min腹腔注射50μg/kgDEX。记录小鼠CLP术后24h内的存活率，在CLP术后0、6、12、24h时取小鼠血清和肺泡灌洗液，用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清和肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。体外培养小鼠肺泡上皮细胞MLE12，分为脂多糖(LPS)组(1μg/mLLPS)和LPS+DEX组(1μg/mLLPS+0.2μg/mLDEX)，处理0、6、12、24h后用ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平，蛋白质印迹法检测细胞外信号调节激酶(ERK)1/2和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平。结果CLP+DEX组小鼠CLP术后24h内的存活率高于CLP组(P<0.05)，6、12、24h时小鼠血清和肺泡灌洗液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平均低于CLP组(P<0.05，P<0.01)。6、12、24h时LPS+DEX组MLE12细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平和ERK1/2磷酸化水平均低于LPS组(P<0.05，P<0.01)，6、12h时JNK的磷酸化水平也低于LPS组(P<0.05，P<0.01)。结论DEX能减少脓毒症小鼠血清和肺泡灌洗液中炎性因子的产生，提高脓毒症小鼠存活率，其机制可能与抑制ERK1/2和JNK信号通路的激活有关。
主要参考资料
[1] 儿科学辞典
[2] 新编实用医学词典
[3] 蓖麻毒素对原代培养小鼠肺泡上皮细胞的影响
[4] 骨髓间充质干细胞条件培养基对小鼠肺泡上皮细胞增殖的影响及机制
[5] 右美托咪定对脓毒症小鼠肺泡上皮细胞的保护作用