背景[1-3]
SK-MES-1人肺鳞癌细胞是一种广泛使用的实验细胞模型，来源于一位患有肺鳞状细胞癌的患者的转移性胸腔积液。这一细胞系因其高度的稳定性和可重复性，在肺癌研究领域中占据着重要的地位。SK-MES-1细胞具有典型的上皮样形态，贴壁生长，并在适当的培养条件下展现出良好的增殖能力。
在培养SK-MES-1细胞时，研究者通常采用MEM培养基作为基础培养基，并添加10%的南美级别胎牛血清和1X非必需氨基酸作为补充。这样的培养条件可以确保细胞在体外环境中的生长和增殖。培养温度应保持在37摄氏度，同时维持5%的CO2浓度，以模拟人体内的生理环境。此外，定期的换液和传代操作也是维持细胞活力和健康状态的关键。
SK-MES-1人肺鳞癌细胞来
SK-MES-1细胞系的广泛应用得益于其高度的肿瘤相关特性。这种细胞系能够模拟肺癌细胞在体内的生长和扩散过程，为肺癌的发病机制、药物筛选和治疗效果评估等研究提供了重要的实验平台。通过利用SK-MES-1细胞系，研究人员可以深入研究肺癌细胞的生物学特性、信号传导途径以及基因表达变化等，为肺癌的早期诊断、治疗和预防提供科学依据。
SK-MES-1人肺鳞癌细胞培养操作
1)复苏SK-MES-1人肺鳞癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)SK-MES-1人肺鳞癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)SK-MES-1人肺鳞癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4][5]
SK-MES-1人肺鳞癌细胞可以用于炎症小体与肺癌及肺纤维化的相关性研究
炎症小体在人肺癌细胞株中的表达目的:研究不同亚型炎症小体及活化产物在不同细胞类型、不同转移能力以及不同化疗敏感性的肺癌细胞株中的表达丰度及其活化后产生炎症因子il-1β的能力。
方法:培养正常人源性肺泡上皮细胞株hpaepics(humanpulmonaryalveolarepithelialcells),正常人支气管上皮细胞株16hbe(humanbronchiepithelialcellline),人肺泡上皮腺癌细胞株a549(humanalveolarepithelialadenocarcinomacellline)及耐顺铂a549/ddp细胞株,SK-MES-1人肺鳞癌细胞(humanlungsquamouscellcancerline),人大细胞肺癌低转移能力95c细胞株和高转移能力95d细胞株[humanlarge-celllungcarcinomacelllineswithlow(95c)orhigh(95d)metastaticpotential],人小细胞肺癌细胞株nci-h446(humansmallcelllungcancercellline);采用定量实时多聚酶链式反应(quantitativereal-timepolymerasechainreaction,qrt-pcr)及蛋白质印记法(westernblotting)测定构成炎症小体的不同组分,包括nod样受体nalp1,nlrp3,nlrc4,aim2,asc,caspase-1以及il-1β和il-18前体及成熟体的表达。采用炭疽致死因子(anthraxlethalfactor,lf),短链同聚双链dna(doublestraineddna,dsdna)片段poly(da:dt),脂多糖(lipopolysaccharides,lps)联合三磷酸腺苷(adenosinetriphosphate,atp),鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白(flagellinfroms.typhimurium)分别活化各细胞株内的nalp1,aim2,nlrp3及nlrc4炎症小体,测定细胞上清液中il-1β水平。
结果:构成炎症小体的不同组分在正常肺源性细胞株及肺癌细胞株内均有表达。其中,nalp1高表达于16hbe、a549及nci-h446细胞株,中等表达于a549/ddp、SK-MES-1人肺鳞癌细胞及95d细胞株,低表达于hpaepics及95c细胞株;aim2高表达于非小细胞肺癌细胞株;nlrp3高表达于a549、95c、95d及nci-h446细胞株;nlrc4在各细胞株间表达水平经统计学检验差异无显著性;asc在a549、95d及nci-h446细胞株中表达水平显著高于两种正常肺源性细胞株(hpaepics和16hbe);pro-caspase-1、pro-il-1β和pro-il-18mrna在各组细胞株表达水平差异统计学检验无显著性,但在肺癌细胞株中caspase-1活化体p10及il-1β和il-18成熟体蛋白水平显著高于正常肺源性细胞株。值得注意的是,在非小细胞肺癌细胞株中,SK-MES-1人肺鳞癌细胞表达aim2、nlrp3、asc、caspase-1活化体、il-1β和il-18成熟体的蛋白水平低于腺癌a549及大细胞肺癌95d细胞株;耐顺铂a549/ddp细胞株表达aim2、nlrp3、asc及il-1β和il-18成熟体的蛋白水平显著低于野生型a549细胞株;低转移性大细胞肺癌95c细胞株表达nalp1、aim2、asc、caspase-1活化体、il-1β和il-18成熟体的蛋白水平显著低于高转移性大细胞肺癌95d细胞株。elisa结果显示,各种细胞株内的炎症小体激活后均可释放il-1β,肺癌细胞释放能力强于正常细胞,且nlrp3炎症小体激活后释放il-1β的能力高于其他亚型的炎症小体。
结论:炎症小体差异性表达于肺癌细胞株,其主要表达亚型及表达水平与肺癌细胞株的细胞学类型、转移能力及化疗敏感性相关;表达于肺癌细胞株的不同亚型炎症小体可被相应的激活剂活化,促进炎症因子il-1β的释放。
参考文献
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[5]孔辉.炎症小体与肺癌及肺纤维化的相关性研究[D].南京医科大学,2016.