背景及概述[1]
人结肠癌长春新碱耐药株生长方式为贴壁，种属是Homosapiens人。培养条件为：1）培养基：RPMI-1640培养基（不含Hepes）+10%胎牛血清+1%双抗；2）温度：37.0°C；3）气体：空气95%，CO25%。人结肠癌长春新碱耐药株培养方法是收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml培养液继续培养。如果人结肠癌长春新碱耐药株已长满（达80-90%）。即可进行传代，具体步骤如下：
1）弃去培养液，用PBS洗1-2次。
2）向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有6ml含10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。
3）加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养4）传代比例：1：2-1：3。有研究探讨中药复方肠胃清对人结肠癌长春新碱耐药株(vincristine，VCR)HCT8/V多药耐药的逆转作用。
采用细胞增殖抑制实验MTT法观察肠胃清药物血清对人结肠癌长春新碱耐药株HCT8/V多药耐药性的逆转作用，采用高效液相色谱方法检测肠胃清药物血清作用后的耐药细胞内VCR药物浓度的改变。实验所采用的人结直肠癌耐VCR细胞株HCT8/V的耐VCR倍数为20.24倍，且对5-氟尿嘧啶、顺铂、羟基喜树碱和丝裂霉素这4种结构和作用机制各异的化疗药物有交叉耐药现象，具有多药耐药性，肠胃清能够逆转HCT8/V的耐药现象。高效液相色谱法结果显示，肠胃清药物血清处理HCT8/V48h后，细胞内的VCR浓度明显增高，且呈剂量依赖性。因此肠胃清药物血清可提高人结肠癌长春新碱耐药株HCT8/V细胞内化疗药物的浓度，有效逆转耐药细胞的多药耐药现象。
主要参考资料
[1]邓皖利，许建华，李长龙，等.肠胃清对人结直肠癌耐长春新碱细胞株HCT8/V的逆转作用[D].，2008