背景[1-6]
人肾成纤维细胞提取物分离自人肾成纤维细胞，人肾成纤维细胞分离自健康人肾脏组织。人肾成纤维细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。人肾成纤维细胞是肾脏结缔组织中最重要的细胞类型，在体外培养中，一般大致成梭形、多角形或不规则形等，为贴壁生长型细胞。刚分离的人肾成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。
人肾成纤维细胞主要功能有：①组成过滤屏障内壁的重要部分；②在炎症和致血栓物质的刺激合成必要的生物活性分子；③受损后影响系膜细胞和上皮细胞，进而影响肾脏病变。大鼠肾成纤维细胞分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、碳酸氢钠等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能，生成肾素、促红细胞生成素、活性维生素D3、前列腺素、激肽等，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行。
肾成纤维细胞是肾脏结缔组织中最重要的细胞类型，在体外培养中，一般大致成梭形、多角形或不规则形等，为贴壁生长型细胞。刚分离的肾成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。
细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。其主要功能有：①组成过滤屏障内壁的重要部分；②在炎症和致血栓物质的刺激合成必要的生物活性分子；③受损后影响系膜细胞和上皮细胞，进而影响肾脏病变。
应用[7][8]
人肾成纤维细胞提取物可用于PDGF-D在肾间质纤维化中对大鼠肾成纤维细胞的影响研究：
PDGF-DD/PDGFR-β信号通路激活对大鼠肾成纤维细胞增殖、转化、细胞外基质表达的影响。方法:体外培养正常大鼠肾成纤维细胞(NRK-49F),按照PDGF-DD刺激浓度分为对照组、1ng/ml组、10ng/ml组、50ng/ml组、100ng/ml组,然后根据50ng/ml PDGF-DD刺激不同时间分为对照组、12h组、24h组、48h组,CCK-8方法检测不同PDGF-DD浓度及PDGF-DD作用不同时间对NRK-49F增殖的影响;Real-time PCR及Western blot检测各组PDGFR-β、α-SMA、collagen typeⅠ、FN、MMP-2、TIMP-1 m RNA、蛋白表达变化。
结果:与对照组相比,PDGF-DD可明显刺激NRK-49F增殖,呈现剂量依赖性(各浓度组细胞增殖率分别为8.17%,19.17%,31.37%,30.77%,P<0.05)及时间依赖性(各时间组细胞增殖率分别为12.70%,25.07%,39.79%,P<0.05)。另外,PDGF-DD可剂量依赖性刺激PDGF-βR、α-SMA、collagen typeⅠ、FN、TIMP-1在m RNA水平及蛋白水平上的表达增加,下调MMP-2的m RNA及蛋白表达。结论:PDGF-DD/PDGFR-β信号通路的激活可显著刺激NRK-49F的增殖、转化及细胞外基质的沉积,从而导致肾纤维化。
参考文献
[1]Molecular targets for treatment of kidney fibrosis[J].Peter Y.Chuang,Madhav C.Menon,John C.He.Journal of Molecular Medicine.2013(5)
[2]The PDGF family in renal fibrosis[J].Tammo Ostendorf,Frank Eitner,Jürgen Floege.Pediatric Nephrology.2012(7)
[3]The platelet-derived growth factor system in renal disease:An emerging role of endogenous inhibitors[J].Claudia R.C.van Roeyen,Tammo Ostendorf,Jürgen Floege.European Journal of Cell Biology.2011(6-7)
[4]Renal interstitial fibrosis:mechanisms and evaluation[J].Alton B.Farris,Robert B.Colvin.Current Opinion in Nephrology and Hypertension.2012(3)
[5]Temporal and Spatial Expression of Matrix Metalloproteinases and Tissue Inhibitors of Metalloproteinases Following Myocardial Infarction[J].Merry L.Lindsey,RogelioZamilpa.Cardiovascular Therapeutics.2012(1)
[6]The myofibroblast:Paradigm for a mechanically active cell[J].Boris Hinz.Journal of Biomechanics.2009(1)
[7]Identification of platelet-derived growth factor D in human chronic allograft nephropathy[J].Gang Liu,Siribha Changsirikulchai,Kelly L.Hudkins,Miriam C.Banas,Jolanta Kowalewska,Xiangling Yang,Tomasz A.Wietecha,John Volpone,Debra G.Gilbertson,Charles E.Alpers.Human Pathology.2008(3)
[8]赵佳.PDGF-D在肾间质纤维化中对大鼠肾成纤维细胞的影响[D].青岛大学,2015.