概述[1][2]
蟾蜍二烯内酯类化合物是从中华大蟾蜍的皮肤中分离得到的一类重要的化合物。它们的主要结构特征是甾体A/B环顺式结构、C/D环顺式结构，并且在C17位有一个吡喃酮环。这一类化合物除了具有有效的强心作用外，还表现出来一系列其它的生物活性，如表面麻醉、抗菌、抗肿瘤等活性。蟾蜍表皮腺体的分泌物经过干燥得到蟾酥——主要成分是多种蟾蜍二烯内酯类化合物，进来的研究表明，伪异沙蟾毒精在抗肿瘤方面表现出独特的作用机制，值得进一步深入研究。
制备[1-2]
方法1：以沙蟾毒精为原料，得伪异沙蟾毒精的途径，总产率达到47%。
方法2：称取蟾皮10Kg，剪碎，以95％乙醇按照1：10的料液比于80℃分别提取3次，每次提取时间为120分钟，合并滤液，滤液减压浓缩至10L，上XAD-4大孔树脂(罗门哈斯公司)，先依次用水和30％乙醇洗去杂质，再用95％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，干燥得到蟾蜍内酯提取物125g。
取蟾蜍内酯提取物75g，经制备型HPLC分离(色谱柱：WatersXterraC18，流动相为A：0.1％甲酸水；B：0.1％甲酸乙腈，梯度条件：5％B～25％B，30min；25％B～50％B，22min；50％B～95％B，18min；95％B，5min，300nm)，1min收集一个馏分，共收集75个馏分(Fr.1～Fr.75)。Fr.24回收溶剂，经Click-CD柱(大连化物所研发)分离(梯度条件为：95％B～60％B，40min，其中A：0.1％甲酸水；B：0.1％甲酸乙腈，检测波长300nm)，收集其中最主要的色谱峰，回收溶剂，得到化合物即为伪异沙蟾毒精。
应用[2]
伪异沙蟾毒精可抑制血管内皮细胞的增殖、迁移、侵袭及体外成环，抑制体内肿瘤微血管的形成，因此可以用于制备抑制血管新生的治疗药物。取状态良好、对数生长期HUVEC血管内皮细胞(购自中科院细胞所)按照5×103个/孔的浓度接种96孔板，置于37℃、含5％CO2的培养箱中，待细胞贴壁后，吸掉原培养液，对照组加入DMEM完全培养基100μl，实验组分别加入含25、50、125nM剂量的伪异沙蟾毒精(每个剂量设3个复孔)的DMEM完全培养基，继续置于37℃细胞培养箱中培养，加药时间点计为0h。48h后，按照CCK-8试剂盒使用说明，吸去培养基，各孔加入100μl10％CCK-8培养基(DMEM培养基90μl+CCK-810μl)，置于37℃、5％CO2的培养箱孵育1h，用多功能酶标仪测450nm处吸光值(A值)计算细胞增殖率。与对照组相比，加入伪异沙蟾毒精后HUVEC细胞的生长明显被抑制，而且伪异沙蟾毒精的剂量越高，抑制作用越显著。实验结果表明，伪异沙蟾毒精对HUVEC细胞的增殖具有剂量依赖的抑制效应。
主要参考资料
[1]由沙蟾毒精(arenobufagin)高效合成伪异沙蟾毒精(ψ-bufarenogin)的方法
[2] CN201510191235.8伪异沙蟾毒精在制备抗血管新生药物中的应用