小鼠趋化因子(FK)ELISA试剂盒的操作步骤

2020/2/17 11:28:48

小鼠趋化因子(FK)ELISA试剂盒概述[1]

小鼠趋化因子(FK)ELISA试剂盒英文名称Mouse chemokine (FK) ELISA Kit,用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中趋化因子(FK)的含量。

小鼠趋化因子(FK)Elisa试剂盒工作原理[1]

小鼠趋化因子(FK)ELISA试剂盒主要是基于抗原或抗体能吸附至固相载体的表面并保持其免疫活性,小鼠趋化因子(FK)抗原或抗体与酶形成的酶结合物仍保持其免疫活性和酶催化活性的基本原理。小鼠趋化因子(FK)在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应,用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开,小鼠趋化因子(FK)zui后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量有一定的比例,加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,小鼠趋化因子(FK)根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。

小鼠趋化因子(FK)Elisa试剂盒实验操作步骤[1]

实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样:分别设空白孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔加待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG工作液
100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
4. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见孔内有明显蓝色,即可终止)。
5. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
6. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

主要参考文献

[1]刘家齐;赵正晓;魏颖;徐飞;张红英;李密辉;陆林玮;魏凯;董竞成。芍药苷对哮喘模型小鼠气道炎症趋化因子及受体的干预作用。中国实验动物学报。

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