背景[1-3]
WPM培养基是一种用于木本植物组织培养专用的商用培养基，产品用法：称取本品2.14g，另取硝酸钙0.56g,加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装，116℃高压灭菌30min备用。
木本植物在维持生态平衡、荒漠土壤改造及城市居民区绿化等起着很重要的作用，随着植物组织培养技术手段的发展和深入，至今世界上已经有多重木本植物经过离体培养后获得完整植株，有些也已经用于生产实践。
影响木本植物培养的因素有很多，其中培养基是其中zui重要的因素。目前应用于木本植物组织培养的主要采用的是低盐培养基，如1/2 MS，B5，WPM。
WPM培养基是1981年由Lloyd和McCown为山月桂茎尖培养专业设计，根据MS培养基改良而来，相对MS培养基而言，使用了硫酸钾替换了KNO3，NH4NO3的含量也降低到了MS培养基的1/4，氮盐也主要以硝酸钙的形式供应。木本植物用培养基（WPM）实验方法实验内容
1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物
3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌
应用[4][5]
用于美国红枫（Acer rubrum）的组织培养技术体系研究
美国红枫(Acer rubrum’Brandywine’),系械树科槭树属,高大落叶乔木,原产地在美国。美国红枫适应性强,具有强度耐旱、耐温、长势迅猛的特性,是园林绿化的优良树种。目前美国红枫研究的一个直接的目标就是大量种苗的供给,而美国红枫组培快繁技术的研究正是解决这一问题的有效途径。本研究以美国红枫的腋芽、带芽茎段、叶片为材料,系统地研究了美国红枫组织培养直接器官和间接器官发生途径的各个培养阶段中基本培养基、生长调节剂和其他添加剂等因素的影响,筛选出了各阶段的适宜培养基,成功地获得了美国红枫组织培养再生植株,建立了系统的美国红枫组织培养植株再生体系。
主要研究成果如下：(1)不同外植体材料消毒的难易程度相差较大,另外外植体消毒的难易程度也容易受到季节因素的影响。
就美国红枫外植体取材部位和取材时间来说,美国红枫以茎段为外植体并在3月-5月取材消毒效果,其平均污染率仅有5.4%,平均存活率为88.5%。
(2)启动培养中,四种培养基中以WPM培养基萌芽率最高,IBA激素以0.5mg/L水平的萌芽率最高,6-BA激素以2.0mg/L水平的萌芽率最高,美国红枫腋芽启动培养的培养基组合为WPM+IBA0.5mg/L+6-BA2.0mg/L
(3)愈伤组织诱导中,五个因素影响的主次顺序为：培养基>外植体>NAA>KT>6-BA。培养基种类中以WPM培养基诱导率最高,外植体中以茎段诱导率最高,NAA浓度中以0.7mg/L水平的诱导率最高,KT浓度中以0.6mg/L水平的诱导率最高,6-BA浓度中以0.4mg/L水平的诱导率最高,美国红枫愈伤组织诱导培养方案为以茎段为外植体并配以WPM+NAA0.7mg/L+KT0.6mg/L+6-BA0.4mg/L培养基配方。
(4)美国红枫愈伤组织接种在附加了不同激素种类不同浓度配比的培养基上培养30d后,均未能分化诱导出芽的分化,只有愈伤组织量的不断增加,愈伤组织的颜色由浅黄色变为淡绿、深绿,随着继代次数的增加,愈伤组织的质量不断下降。
(5)不同基本培养基及激素水平组合对美国红枫试管苗生根率影响差异较大。极差分析结果显示,四因素对试验结果影响的主次顺序为：6-BA>GA3>培养基>IBA。其中MS+IB A2.0mg/L+6-B AOmg/L+GA31.Omg/L这一组合生根率最高,高达93.3%,根据k值的大小,比较四个因素水平求得组合仍为这一组合；其次是WPM+IBA1.5mg/L+GA30.5mg/L组合,生根率为80.0%。
(6)美国红枫移栽前,闭、开瓶锻炼对结果影响较大,闭瓶锻炼6d后开瓶炼苗2d的移栽成活率最高,达86.7%,其次就是闭瓶锻炼6d后开瓶炼苗3d,移栽成活率也达到了83.3%。不同基质处理对美国红枫组培苗移栽成活率有显著性影响。其中最有利于栽植的基质为沙与腐殖质等比混合的基质,其平均成活率达到了81.1%；其次为腐殖质,成活率为60.0%。
参考文献
[1]Medium and genotype factors influencing shoot regeneration from cotyledonary explants of Chinese cabbage(Brassica campestris L.ssp.pekinensis)[J].F.-L.Zhang,Y.Takahata,J.-B.Xu.Plant Cell Reports.1998(10)
[2]Internal bacterial contamination of micropropogated hazelnut:identification and antibiotic treatment[J].Barbara M.Reed,Jessica Mentzer,Piyarak Tanprasert,Xiaoling Yu.Plant Cell,Tissue and Organ Culture.1998(1)
[3]Effects of Medium Composition on in vitro Germination of Embryos of Fraxinus excelsior at Different Stages of Development[J].Johanna Wagner,Isolde Ikafka.Journal of Plant Physiology.1995(4)
[4]Effect of genotype on shoot regeneration from cotyledonary explants of rapeseed(Brassica napus L.)[J].Yuji Ono,Yoshihito Takahata,Norihiko Kaizuma.Plant Cell Reports.1994(1)
[5]于传.美国红枫（Acer rubrum）的组织培养技术体系研究[D].西南大学,2013.