概述[1]
病毒是一类个体微小,结构简单,只含单一核酸,必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型微生物。病毒在自然界分布广泛,可感染人体细胞,在细胞内解体释放出核酸分子,借细胞内环境的条件以独特的生命活动体系进行复制,常引起人体发病。目前知道的DNA病毒有乙肝病毒,T2噬菌体,天花病毒,花椰菜花叶病毒等,本发明适用于所有的感染人类的血液中的病毒基因组DNA的提取,在已知的DNA病毒中,因为乙肝病毒对人类的影响和危害,传染性最强,因此本发明尤其适用于乙肝病毒基因组DNA的提取。
目前DNA检查已有逐步取代血清学检查(ELISA检测)的趋势,尤其是乙肝病毒的检测,乙肝病毒DNA检测已经成为临床乙肝病毒诊断的主要方法之一。要进行病毒DNA检查,首先步也是最关键的一步便是要提取人体血液中病毒基因组DNA。
目前,提取乙肝病毒DNA的方法很多,有煮沸法、沉淀法、吸附法等,但这些方法有一个共同缺点:首先必须对血液进行血浆和血清分离,用分离后的血清作为提取病毒DNA的标本,这将造成以下几个问题:1)步骤繁琐,增加工作量;2)操作过程中易二次污染,造成假阳性结果;3)在分离时易造成病毒DNA的损失,对于微量病毒DNA检测有影响,甚至检测不到,形成假阴性结果。因此,不用进行血清和血浆分离,研发一种直接从人体全血中病毒DNA提取试剂盒和方法意义重大。
适用范围
病毒DNA提取试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因组,不适合于RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
组分[2]
(1)病毒DNA提取试剂盒中的WashingBuffer中已经加乙醇,无需单独添加。
(2)VirusDNA/RNALB1,储存时可能会有白色结晶沉淀,放置于56℃水浴锅溶解后,不影响使用效果。
(3)蛋白酶K(20mg/ml)长期保存请储存于-20℃,短期室温保存(6个月),其它组分储存于室温。
特征[2]
毒DNA提取试剂盒仅需10min即得到高质量病毒DNA和RNA。操作简单,无有机抽提或乙醇沉淀。重复性强,产量高。完全去除污染物和抑制剂,方便下游应用。
案例[2]
应用病毒RNA提取试剂盒(B0129)从含(107copies/ml,106copies/ml,105copies/ml,104copies/ml,103copies/ml)丙型肝炎病毒(HCV)的血清样品中纯化得到病毒RNA,逆转录后进行qPCR,如图所示,可检测并稳定扩增103copies/ml的HCV病毒(每个PCR体系中约含10copies的HCV病毒分子)。
主要参考资料
[1] 协和医学词典
[2] 病毒RNA提取试剂盒操作说明