概述[1][2]
本试剂盒适用于从粪便样本中提取总DNA,包括细胞、细菌、寄生虫以及病毒DNA,也适用于含有高浓度PCR反应抑制剂的样本。本品可处理多至300 mg的粪便样本,纯化获得主要为20-30 kb的DNA片段,纯化过程中不需苯酚或氯仿等有毒溶剂,无需乙醇沉淀,可在一小时内获得高纯度的DNA。本试剂盒采用独特的缓冲系统使裂解液中的DNA高效结合到吸附柱上,同时粪便中的蛋白杂质及抑制下游反应的其他有机化合物可流过膜,PCR和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过两步洗涤步骤有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
试剂盒组成[1]
实验前准备及重要注意事项[2]
1、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量下降。
2、次使用前应按照试剂瓶标签的说明预先在Buffer GW1和GW2中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer SL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer SL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
4、如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以在加入Buffer SL后加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml), RNase A本试剂盒并未提供。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤11所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤11;可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
6)基因组DNA模板中残余的微量PCR抑制物可能对PCR反应产生不良影响,可将DNA稀释2-10倍通常即可解决。
储存条件:室温(15~30℃)。
主要参考资料
[1] 粪便基因组DNA提取试剂盒产品说明书