背景[1-3]
HT-1080[HT1080]细胞专用培养基是人纤维肉瘤细胞专用培养基，该培养基含有HT-1080[HT1080]细胞生长所需的所有成分可以很好的维持人纤维肉瘤细胞的形态。
细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。
4.移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。
应用[4][5]
用于KIF20A通过PI3K-AKT信号通路促进纤维肉瘤发生发展的研究
采用WGCNA的方法筛选出与软组织肉瘤发生发展密切相关的核心基因KIF20A。纤维肉瘤是软组织肉瘤中最常见的一个组织学类型。
在体外实验中,以KIF20A敲低的纤维肉瘤细胞作为研究对象,通过转录组测序检测KIF20A对纤维肉瘤细胞基因表达的影响;通过CCK-8、流式细胞术、Western blot及克隆形成实验检测KIF20A对细胞增殖的影响;通过流式细胞术和Western blot检测KIF20A对细胞凋亡的影响;通过划痕、Transwell迁移和侵袭实验检测KIF20A对细胞迁移侵袭能力的影响;通过Western blot对相关的分子机制进行研究;在体内实验中,用KIF20A敲低的纤维肉瘤细胞构建荷瘤鼠,通过记录肿瘤大小及重量检测KIF20A对肿瘤生长的影响,通过Ki67免疫组织化学染色检测KIF20A对增殖的影响,并通过小动物成像和HE染色检测KIF20A对肿瘤转移的影响。
通过RT-qPCR及Western blot对人纤维肉瘤细胞系HT-1080中核心基因的表达情况进行检测,发现KIF20A在基因水平和蛋白水平均显著高于对照细胞系。
参考文献
[1]Roles and Mechanisms of Kinesin-6 KIF20A in Spindle Organization during Cell Division[J].Wu Wen-Da,Yu Kai-Wei,Ning Zhong,Yu Xiao,Zhen-Yu She.European Journal of Cell Biology.2018
[2]Overexpression of KIF20A confers malignant phenotype of lung adenocarcinoma by promoting cell proliferation and inhibiting apoptosis[J].Xia Zhao,Lei‐lei Zhou,Xiaoyou Li,Jie Ni,Ping Chen,Rong Ma,Jianzhong Wu,Jifeng Feng.Cancer Medicine.2018(9)
[3]KIF20A expression as a prognostic indicator and its possible involvementin the proliferation of ovarian clear?cell carcinoma cells[J].Yosuke Kawai,Kiyosumi Shibata,Jun Sakata,Shiro Suzuki,Fumi Utsumi,Kaoru Niimi,Ryuichiro Sekiya,Takeshi Senga,Fumitaka Kikkawa,Hiroaki Kajiyama.Oncology Reports.2018(1)
[4]Aberrant KIF20A expression might independently predict poor overall survival and recurrence‐free survival of hepatocellular carcinoma[J].Mingqin Lu,Xiaoying Huang,Yongping Chen,Yangyang Fu,Chaona Xu,Wei Xiang,Cheng Li,Shengguo Zhang,Chang Yu.IUBMB Life.2018(4)
[5]朱振华.KIF20A通过PI3K-AKT信号通路促进纤维肉瘤发生发展的研究[D].吉林大学,2020.