背景[1-3]
人醛糖还原酶(AR)ELISA KIT是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人醛糖还原酶(AR)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人醛糖还原酶(AR)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于醛糖还原酶（AR）通过与AKT1蛋白的直接相互作用上调AKT/mTOR信号通路和促进肝癌的发生发展研究
醛糖还原酶（AR,aldose reductase）在肝细胞癌（HCC,hepatocellular carcinoma）发生发展过程中有显著上调,但具体机制并不清楚。研究了异常表达的醛糖还原酶（AR）在肝细胞和肝组织癌变过程中的作用与机制。
原理:通过利用体外培养的肝癌细胞系、人醛糖还原酶（AR）肝特异性过表达转基因小鼠及醛糖还原酶（Ar）敲除小鼠,研究了醛糖还原酶（AR）的过表达、敲降或敲除对于AKT/mTOR信号通路、乳酸形成、KEAP1/NRF2和TNFα/IL-6 mRNA表达量的影响。
此外,通过研究二乙基亚硝胺（DEN,diethylnitrosamine）诱导人醛糖还原酶（AR）肝特异性过表达转基因小鼠及醛糖还原酶（Ar）敲除小鼠建立的肝癌模型,进一步证实了上述结果。
结果:通过AR与AKT蛋白的相互作用,高表达的醛糖还原酶（AR）增加了AKT1/2蛋白的稳定性;敲降醛糖还原酶（AR）减弱了AKTl/2蛋白的稳定性。随后,增强或减弱AR-AKT1的相互作用都会引起AKT/mTOR信号通路、乳酸生成、抗氧化防御信号及炎症反应的异常调节。
在动物实验中,发现醛糖还原酶（AR）肝特异性过表达会促进二乙基亚硝胺（DEN）引起的小鼠肝细胞癌,醛糖还原酶（Ar）敲除会抑制二乙基亚硝胺（DEN）引起的小鼠肝细胞癌。并进一步证实了醛糖还原酶（AR）对于肝癌发生发展的调节作用至少部分是通过调节AKT/mTOR信号通路、抗氧化防御信号、肝代谢改变和炎症反应来实现。
参考文献
[1]Signaling specificity in the Akt pathway in biology and disease[J].Alex Toker,Sandra Marmiroli.Advances in Biological Regulation.2014
[2]Knockdown or inhibition of aldo-keto reductase 1B10 inhibits pancreatic carcinoma growth via modulating Kras–E-cadherin pathway[J].Wanying Zhang,Haonan Li,Yihe Yang,Jie Liao,Guang-Yu Yang.Cancer Letters.2014(2)
[3]HIF-1-Mediated Suppression of Acyl-CoA Dehydrogenases and Fatty Acid Oxidation Is Critical for Cancer Progression[J].De Huang,Tingting Li,Xinghua Li,Long Zhang,Linchong Sun,Xiaoping He,Xiuying Zhong,Dongya Jia,Libing Song,Gregg L.Semenza,Ping Gao,Huafeng Zhang.Cell Reports.2014(6)
[4]Aldose reductase regulates miR-200a-3p/141-3p to coordinate Keap1–Nrf2,Tgfβ1/2,and Zeb1/2 signaling in renal mesangial cells and the renal cortex of diabetic mice[J].Jie Wei,Ye Zhang,Yu Luo,Zhen Wang,Shulin Bi,Dan Song,Yuan Dai,Tao Wang,Longxin Qiu,Longping Wen,Li Yuan,James Y.Yang.Free Radical Biology and Medicine.2014
[5]赵家星.醛糖还原酶（AR）通过与AKT1蛋白的直接相互作用上调AKT/mTOR信号通路和促进肝癌的发生发展[D].厦门大学,2015.