背景[1-3]
上皮细胞生长因子指在组织培养中,除了氨基酸、维生素、葡萄糖以及无机盐等正常成分之外,可以代替培养基血清高分子物质的而促进细胞生长的物质。
生长因子多为广义的肽激素,有胰岛素、表皮生长因素(EGF)、成纤细胞生长因素(fibroblast growth factor,FGF)、血小板来源增殖因素(platelet-derivedgrowth factor,PDGF)以及生长激素释放抑制因子(somatostatin=SRIH)等。在肽激素之外,皮质醇和甲状腺素(T3)等也属于生长因子。
上皮细胞生长因子结构图
EGF是人体内存在的一种生长因子,它的主要功能是促进皮肤细胞的分裂。研究表明:极微量的EGF能强烈刺激细胞生长,抑制衰老基因表达,阻止皮肤衰老,使皮肤各组成份保持生理状态。
EGF能促进上皮细胞、成纤维细胞的增殖;增强表皮细胞的活力;延缓表皮细胞的老化,使肌肤各组成成份保持生理状态。高活性的EGF才能促进皮肤细胞的分裂和生长,此外它还能刺激细胞外一些大分子(如透明质酸和胶原白等)的合成与分泌。
重组人表皮生长因子(rh-EGF),大量存在于人体上皮细胞内,它可刺激上皮细胞和内皮细胞生长,使新的表皮细胞不断长成,将死皮层推动并逐渐脱落,保持肌肤细嫩光滑。同时促进皮肤各种细胞的新陈代谢,增强细胞吸收营养物质。
应用[4][5]
用于调控HIF-1α对鼻黏膜上皮细胞生长因子表达的影响研究
用短发夹RNA(shRNA)特异性沉默人鼻黏膜上皮细胞(human nasal epithelial cells,HNEC)缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1αHIF-1α),观察其对HNEC表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)β1、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF/fibroblast growth factor-2,FGF-2)三种生长因子的影响。
方法:取因鼾症行下鼻甲切除术患者的下鼻甲黏膜,体外培养原代细胞,体外设计合成以腺病毒为载体GFP标记的shRNA(包括ad-HIF shRNA及ad-HIF shRNA-neg).将细胞分为空白对照组、无义寡核苷酸阴性对照组(ad-HIF shRNA-neg)、ad-HIF shRNA干扰组、低氧培养组。
蛋白质免疫印迹试验Western blot技术检测转染病毒后HNEC中HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的蛋白的表达情况;RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的mRNA的表达情况。结果转染ad-HIF shRNA-neg前后,HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的蛋白差异(q1=1.3167;q2=0.7513;q3=0.3251;q4=0.6592)及其mRNA差异(q1=2.3514;q2=37.0480;q3=17.1131;q4=1.0917)均无统计学意义(p>0.05)。
与阴性对照组及空白对照组相比,转染ad-HIF shRNA后,]BF-1α表达蛋白下降40%(q=31.4690),mRNA表达下降39%(q=16.5900),差异均有统计学意义(p<0.05);同时VEGF.TGF-β1、bFGF的蛋白及mRNA表达也随之下降,蛋白差异(q1=19.1571;q2=33.8090;q3=45.8940)及mRNA差异(q1=22.3920;q2=17.8800;q3=11.5991)均有统计学意义(p<0.05);
与阴性对照组及空白对照组相比,低氧培养HNEC,其HIF-1α表达蛋白升高50%(q=32.3540),mRNA表达升高46%(q=15.4570)差异均有统计学意义(p<0.05);
同时VEGF.TGF-β1、bFGF的蛋白及mRNA表达也随之升高,蛋白差异(q1=20.2410;q2=35.2010;q3=47.3150)及mRNA差异(q1=21.4713;q2=18.3710;q3=10.3651)均有统计学意义(p<0.05)。
参考文献
[1]Mitochondrial metabolic remodeling in response to genetic and environmental perturbations[J].Kate E.R.Hollinshead,Daniel A.Tennant.Wiley Interdisciplinary Reviews:Systems Biology.2016(4)
[2]House dust mite extract induces growth factor expression in nasal mucosa by activating the PI3K/Akt/HIF-1αpathway[J].Xi Chen,Ying-Ying Li,Wei-Qiang Zhang,Wei-Ming Zhang,Han Zhou.Biochemical and Biophysical Research Communicatio.2015
[3]Oxymatrine suppresses proliferation and induces apoptosis of hemangioma cells through inhibition of HIF-1a signaling[J].Z-W Fei,M-K Qiu,X-Q Qi,Y-X Dai,S-Q Wang,Z-W Quan,Y-B Liu,J-M Ou.International Journal of Immunopathology and Phar.2015(2)
[4]Circulating factors are involved in hypoxia-induced hepcidin suppression[J].Giulia Ravasi,Sara Pelucchi,Federico Greni,Raffaella Mariani,Andrea Giuliano,Gianfranco Parati,Laura Silvestri,Alberto Piperno.Blood Cells,Molecules and Diseases.2014(4)
[5]李盈盈.调控HIF-1α对鼻黏膜上皮细胞生长因子表达的影响[D].南京医科大学,2016.