背景[1-3]
大鼠总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠总胆汁酸(TBA)水平。用纯化的大鼠总胆汁酸(TBA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大鼠总胆汁酸(TBA)，再与HRP标记的总胆汁酸(TBA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的总胆汁酸(TBA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠总胆汁酸(TBA)浓度。
大鼠总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
应用[4][5]
用于溪黄草水提液对胆汁淤积大鼠模型药效作用机制及PK-PD研究
研究溪黄草水提液（XHC）及活性成分迷迭香酸（Rosmarinicacid,RosA）对α-萘异硫氰酸酯（alpha-naphthylisothiocyanate,ANIT）诱发胆汁淤积性肝损伤的保护作用及对法尼醇X受体（farnesoid X receptor,FXR）和转运体胆盐输出泵（Bilesalt export pump,BSEP）、多药耐药相关蛋白2（Multidrug resistance protein 2,MRP2）基因转录水平和蛋白表达的影响。
方法：1.XHC及其RosA的急性毒性实验研究经LD50预试显示二者毒性较低,无法检测出LD50，故测定XHC及RosA的日内给药量,并连续观察与记录14天动物一般活动状态（动物外观、行为）,肝脏行病理观察。
2. 建立溪黄草中咖啡酸、夏佛塔苷、阿魏酸、牡荆苷、迷迭香酸的HPLC-UV测定方法并对其进行提取工艺的考察建立简单、快速、灵敏的HPLC-UV检测方法,对溪黄草原药材中主要水溶性成分进行含量测定,比较蒸馏水煎煮法、100%甲醇超声提取方式、50%、70%、95%乙醇提取方式对溪黄草成分含量的影响。
3.观察XHC及RosA对ANIT诱发的大鼠胆汁淤积模型的影响大鼠一次灌胃ANIT造成急性肝内胆汁淤积模型,空白对照组、模型对照组（80mg·kg-1ANIT）、XHC氏剂量组（25g生药kg-1）、XHC中剂量组（40g生药·kg-1）、XHC高剂量组（80g生药kg-1）、RosA低剂量组（25mg·kg-1）、RosA中剂量组（50mg·kg-1）、RosA高剂量组（100mg·kg-1）,阳性对照组（100mg·kg-1雄去氧胆酸）,按灌胃体积10mL·kg-1连续给药7天后测定胆汁流量、胆汁成分中总胆红素（Total bilirubin,TBIL）、总胆汁酸（Total bile acid,TBA）、检测肝功能血清中天门冬氨酸氨基转移酶（Aspartate transaminase,AST）、丙氨酸氨基转移酶（Alanine aminotransferase,ALT）、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、直接胆红素（Direct bilirubin,DBIL）、总胆红素（Total bilirubin,TBIL）、总胆汁酸（Total bile acid,TBA）指标和丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）指标、肝脏组织抗氧化酶（MDA、SOD GSH）指标,对肝脏组织进行病理学检查、对肝细胞进行超微结构检查,并对肝脏中胆汁酸核受体FXR、转运体MRP2和BSEP的基因转录水平及其蛋白表达量的影响。
参考文献
[1]Oxidized limonene and oxidized linalool–concomitant contact allergy to common fragrance terpenes[J].Johanna Br?red Christensson,Ann‐Therese Karlberg,Klaus E.Andersen,Magnus Bruze,Jeanne D.Johansen,Bego?a Garcia‐Bravo,Ana Giménez Arnau,Chee‐Leok Goh,Rosemary Nixon,Ian R.White.Contact Dermatitis.2016(5)
[2]Identification of flavonoids from Flammulina velutipes and its neuroprotective effect on pheochromocytoma-12 cells[J].Qiuhui Hu,Jie Yu,Wenjian Yang,Benard Muinde Kimatu,Yong Fang,Ning Ma,Fei Pei.Food Chemistry.2016
[3]Production of rosmarinic acid and salvianolic acid B from callus culture of Salvia miltiorrhiza with cytotoxicity towards acute lymphoblastic leukemia cells[J].Ching-Fen Wu,Anastasia Karioti,Doris Rohr,Anna Rita Bilia,Thomas Efferth.Food Chemistry.2016
[4]Chemical Constituents and Biological Activity of Chinese Medicinal Herb‘Xihuangcao’[J].Lianzhu Lin,Yi Dong,Bao Yang,Mouming Zhao.Combinatorial Chemistry and High Throughput Screening.2011(8)
[5]闵剑斌.溪黄草水提液对胆汁淤积大鼠模型药效作用机制及PK-PD研究[D].广州中医药大学,2016.