背景[1-3]
NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株。
NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞
亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化。可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。
这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。
其亲本IL-2依赖的细胞株NK-92细胞及另一株同样来源于NK-92细胞株的IL-2非依赖的细胞株NK-92CI都可从ATCC得到。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而亲本细胞不合成表达。
1998年9月提交到ATCC的培养物污染了支原体，其后代通过BM细胞周期蛋白处理21天消除支原体。处理后6周，用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测，结果都呈阴性。
生长培养基： MEMα＋0.2mM Inositol＋0.1mMβ-mercaptoethanol＋0.02mM Folic Acid＋12.5%HS＋12.5%FBS＋1%P/S；
培养条件气相：空气，95%；CO2，5%，温度：37℃。
应用[4][5]
用于红桂木凝集素对B淋巴细胞、NK细胞生长的影响及其机制研究
以脾脏来源B细胞、NK92MI细胞为研究对象,观察ALL对其生长的影响,并初步探索其机制,以期对ALL的免疫调控作用有新的认识,为其在临床疾病防治等方面的开发应用奠定良好的理论和实验基础。
方法:1.ALL对B细胞、NK92MI细胞增殖的影响1、ALL对B细胞增殖的影响无菌条件下取小鼠脾脏,采用Easy SepTM Mouse B cell isolation kit分离纯化B淋巴细胞,将不同浓度红桂木凝集素溶液分别作用B细胞72 h后,倒置显微镜下观察细胞形态,CCK-8法检测B细胞的增殖抑制率。
2. ALL对NK92MI细胞增殖的影响常规培养人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞NK92MI细胞,NK92MI细胞经不同浓度红桂木凝集素溶液分别作用48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态,CCK-8法检测NK92MI细胞的增殖抑制率;FACS检测细胞内功能蛋白granzymeA、granzymeB、granulysin、perforin的表达。
ALL受体的初步分析FACS分析ALL与NK92MI细胞的结合;FACS分析半乳糖抑制ALL与NK92MI细胞的结合;FITC-ALL与PE-CD45双染的FACS分析;ALL受体与CD45的共定位分析;ALL内吞的观察。
ALL诱导NK92MI细胞凋亡的机制研究常规培养人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞NK92MI细胞,NK92MI细胞经不同浓度红桂木凝集素溶液分别作用24h,Annexin-V/PI双染检测NK92MI细胞凋亡;透射电子显微镜观察凋亡小体;PI染色法分析细胞亚二倍体。
FACS分析半乳糖对ALL诱导凋亡的抑制作用。荧光定量PCR分析凋亡相关基因的差异表达。FACS检测Caspase-3、Cytochrome-c的表达,Caspase 3抑制剂Z-DEVD-FMK对ALL诱导凋亡的抑制作用。
参考文献
[1]Effect of carbamate pesticides on perforin,granzymes A-B-3/K,and granulysin in human natural killer cells[J].Qing Li,Maiko Kobayashi,Tomoyuki Kawada.International Journal of Immunopathology and Phar.2015(3)
[2]Plant lectins,from ancient sugar‐binding proteins to emerging anti‐cancer drugs in apoptosis and autophagy[J].Q.‐L.Jiang,S.Zhang,M.Tian,S.‐Y.Zhang,T.Xie,D.‐Y.Chen,Y.‐J.Chen,J.He,J.Liu,L.Ouyang,X.Jiang.Cell Prolif..2015(1)
[3]Role of PI3K/Akt/mTOR and MEK/ERK pathway in Concanavalin A induced autophagy in HeLa cells[J].Bibhas Roy,Arup K.Pattanaik,Joyjyoti Das,Sujit K.Bhutia,Birendra Behera,Prashant Singh,Tapas K.Maiti.Chemico-Biological Interactions.2014
[4]Antitumor effect of soybean lectin mediated through reactive oxygen species-dependent pathway[J].Prashanta Kumar Panda,Subhadip Mukhopadhyay,Birendra Behera,Chandra Sekhar Bhol,Sandeep Dey,Durgesh Nandini Das,Niharika Sinha,Akalabya Bissoyi,Krishna Pramanik,Tapas K.Maiti,Sujit K.Bhutia.Life Sciences.2014(1-2)
[5]尹利君.红桂木凝集素对B淋巴细胞、NK细胞生长的影响及其机制研究[D].广西医科大学,2016.