背景[1-3]
C666-1鼻咽癌细胞是EBV阳性鼻咽癌细胞系，是来源于阳性鼻咽癌的上皮细胞样贴壁细胞。培养条件为RPMI-1640+10%FBS+1%双抗，生长条件为气相：5%CO2；95%空气温度：37℃。
C666-1鼻咽癌细胞
培养步骤：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约6ml培养基，培养过夜），第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1.弃去培养瓶中上清液，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2
分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻
敲几下培养瓶后加6ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。
3.吹打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：4的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。
应用[4][5]
用于C666-1和CNE2细胞的HMME-PDT杀伤效应实验研究
概述了光动力学疗法（Photodynamic Therapy,PDT）在鼻咽癌治疗中的基础研究和临床应用现状。截至目前,在鼻咽癌的PDT研究中,绝大多数细胞或动物实验研究所选用的细胞是不能持续表达EB病毒的CNE2和HK1,但临床研究发现,95%的鼻咽癌患者的细胞中检测出EB病毒。
目前,C666-1细胞是唯一能持续表达EB病毒的鼻咽癌细胞。为此,实验比较研究了HMME-PDT对两种不同类型鼻咽癌细胞C666-1和CNE2的杀伤效应,并对结果进行了深入分析和讨论,为临床鼻咽癌光动力学治疗提供理论基础。
实验结果表明,C666-1和CNE2细胞中HMME的潴留浓度随着孵育时间增加而增大,但CNE2细胞对HMME的吸收明显高于C666-1;随着孵育时间的增加,两种鼻咽癌细胞对HMME的吸收均趋于饱和。HMME主要分布在C666-1和CNE2细胞的细胞核外周,两者没有显著的差异。
在外界药物孵育浓度相同的情况下,C666-1和CNE2细胞存活率均随光剂量的增加而减小,HMME-PDT对C666-1和CNE2细胞杀伤效果存在显著差异,CNE2的细胞存活率小于C666-1。当细胞内潴留的药物量基本相同时,两种细胞的存活率没有明显差异。细胞内光敏剂的潴留浓度和光剂量是决定PDT疗效的关键要素。
参考文献
[1]Fluence rate as a modulator of PDT mechanisms[J].Barbara W.Henderson,Theresa M.Busch,John W.Snyder.Lasers Surg.Med..2006(5)
[2]Expression of Y-Box binding protein-1 following hypericin-mediated photodynamictherapy in well-differentiated nasopharyngeal cancer in vivo[J].Hong-Yan Du,Malini Olivo,Ying-Jie Chen,George Yip,Puay-Hoon Tan,Ken Matsumoto,Masafumi Tsujimoto,Boon-Huat Bay.International Journal of Molecular Medicine.2005(5)
[3]Biodistribution and photodynamic therapy with hypericin in a human NPCmurine tumor model[J].Hong-Yan Du,Boon-Huat Bay,Malini Olivo.International Journal of Oncology.2003(5)
[4]Photodynamic activities of sulfonamide derivatives of porphycene on nasopharyngeal carcinoma cells[J].Nai-Ki Mak,Tsz-Wai Kok,Ricky Ngok-Shun Wong,Sum-Wai Lam,Yan-Kin Lau,Wing-Nang Leung,Nai-Ho Cheung,Dolly P.Huang,Lam-Lung Yeung,Chi K.Chang.Journal of Biomedical Science.2003(4)
[5]陈争.C666-1和CNE2细胞的HMME-PDT杀伤效应实验研究[D].福建师范大学,2009.