背景[1-3]
生物素标记的兔抗生物素抗体IGG是一类可以特异性结合生物素标记的兔抗生物素的单克隆抗体,主要用于体外检测生物素标记的兔抗生物素的免疫学实验。
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。
生物素标记的兔抗生物素抗体IGG免疫组化
用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群,可制备针对一种抗原表位的特异性抗体,即单克隆抗体。
生物素又称维生素H、辅酶R,是水溶性维生素,也属于维生素B族,B7。它是合成维生素C的必要物质,是脂肪和蛋白质正常代谢不可或缺的物质。是一种维持人体自然生长、发育和正常人体机能健康必要的营养素。
生物素可以用作核酸探针的标记物,它能与核酸分子的UTP或dUTP 5‘位上的C相结合,并可与亲和素结合而被检测。在检测的过程中,生物素只用作固定连接,而不用作信号检测。
应用[4][5]
用于胶体金核酸层析检测5种检疫性植物病毒的研究
选择我国进境植物检疫性有害生物名单中的番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus,ToRSV)、烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)、南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)、番茄黑环病毒(Tomato black ring virus,TBRV)、菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)等5种检疫性病毒为研究对象,将核酸扩增的高灵敏度和胶体金免疫层析方法的快速简便、直观的优点结合起来,建立了检疫性植物病毒PCR扩增产物的胶体金层析快速检测方法。
5种病毒的PCR检测:依据ToRSV、TRSV、ArMV、TBRV和BPMV等5种病毒基因组中的特异性保守序列,分别设计合成了相应的PCR引物。并对每种病毒的一对PCR引物分别进行标记,用生物素标记一条引物,用荧光素(或地高辛)标记另一条引物,通过PCR扩增产生双标记的扩增产物,利用胶体金试纸条对扩增产物进行检测。胶体金试纸条的制备:用传统的柠檬酸三钠还原法制备出20-30nm胶体金颗粒。
对比了生物素抗体、亲和素、链霉亲和素等物质与生物素的结合效果,选择其中效果的生物素抗体(兔抗生物素多克隆抗体)标记在胶体金上。在试纸条抗体固相硝酸纤维素层析膜(NC膜)上靠近玻璃纤维素膜的一端点上1μL的荧光素单克隆抗体(或地高辛单克隆抗体)作为T检测点。在NC膜上靠近吸水纸一端点上1μL羊抗兔多克隆抗体作为C质控点。
PCR产物经试纸条检测:混合金标抗体,双标记的PCR产物和PBS缓冲液,插入试纸条进行检测。计时15min,C点和T点都显色检测结果阳性,C点显色而T点不显色则检测结果阴性,C点不显色则结果不能判断。
利用这种胶体金核酸层析法成功检测了上述5种病毒,该方法更为简便、快速。利用所建立的胶体金核酸免疫层析试纸进行了双重检测,即在一张试纸条上同时检测两种病毒,成功检测了TRSV和ToRSV,TBRV和ArMV的组合。
参考文献
[1]Lateral flow(immuno)assay:its strengths,weaknesses,opportunities and threats.A literature survey[J].Geertruida A.Posthuma-Trumpie,Jakob Korf,Aart Amerongen.Analytical and Bioanalytical Chemistry.2009(2)
[2]Comparison of a new gold-immunochromatographic assay for the detection of antibodies against avian influenza virus with hemagglutination inhibition and agar gel immunodiffusion assays[J].DaPeng Peng,SiShun Hu,Yan Hua,YunCai Xiao,ZiLi Li,XiLiang Wang,DingRen Bi.Veterinary Immunology and Immunopathology.2007(1)
[3]Molecular Epidemiology of Adenoviral Conjunctivitis in Hanoi,Vietnam[J].Xue-Hai Jin,Hiroaki Ishiko,Nguyen Thanh Ha,Takeshi Ohguchi,Masataka Akanuma,Koki Aoki,Shigeaki Ohno.American Journal of Ophthalmology.2006(6)
[4]Development of an immunochromatographic test kit for rapid detection of bovine viral diarrhea virus antigen[J].K.Kameyama,Y.Sakoda,K.Tamai,H.Igarashi,M.Tajima,T.Mochizuki,Y.Namba,H.Kida.Journal of Virological Methods.2006(1)
[5]曹成.胶体金核酸层析检测5种检疫性植物病毒的研究[D].河南工业大学,2011.