背景[1-3]
人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)水平。用纯化的人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)(LBP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)(LBP),再与HRP标记的解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)(LBP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色，颜色的深浅和样品中的解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)(LBP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)(LBP)浓度。
人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)
操作步骤：
1、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
5、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
6、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟.
7、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
应用[4][5]
用于非小细胞肺癌患者ADAM8的表达及临床意义研究
研究解整合素-金属蛋白酶8（ADAM8）在人非小细胞肺癌（NSCLC）血清和组织中的表达规律,分析其与人NSCLC临床病理特征的关系,初步探讨ADAM8在NSCLC中的诊断价值,以及与癌胚抗原（CEA）联合检测的意义。
方法：1、应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测62例非小细胞肺癌患者、27例良性肺病患者和32例健康体检者血清中ADAM8的蛋白表达水平,同时用放射免疫分析法（RIA）检测以上所有研究对象血清中CEA的蛋白表达水平。2、应用组织芯片和免疫组织化学技术,检测96例NSCLC组织、36例癌旁组织及12例肺良性病变组织中ADAM8蛋白的表达情况。
结果：1、血清ADAM8、CEA水平在NSCLC组[（456.88±143.87）pg/mL,（18.69±8.99）ng/mL]均高于良性肺病组[（271.63±74.20）pg/mL,（3.70±1.37）ng/mL]和正常对照组[（253.09±72.15）pg/mL,（3.15±1.69）ng/mL],差异有统计学意义（P<0.01）,良性肺病组中ADAM8和CEA的表达水平与正常对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）;
2、NSCLC组、良性肺病组和正常对照组三组研究对象中ADAM8和CEA的表达水平与性别或年龄无关（P>0.05）;
3、ADAM8在腺癌患者的表达水平[（462.54±161.38）pg/mL]与鳞癌[（449.04±118.03）pg/mL]相比差异无统计学意义（P>0.05）,而CEA在腺癌患者的表达水平[（20.93±10.57）ng/mL]比鳞癌[（8.31±4.50）ng/mL]高,经比较差异有统计学意义（P<0.05）;
参考文献
[1]Expression of ADAM15 in lung carcinomas[J].Virchows Archiv.2005(4)
[2]Expression of ADAMs（a disintegrin and metalloproteases）and TIMP-3（tissue inhibitor of metalloproteinase-3）in human prostatic adenocarcinomas[J].Dev Karan,Frank Lin,Michael Bryan,J?erg Ringel,Nicolas Moniaux,Ming-Fong Lin,Surinder Batra.International Journal of Oncology.2003(5)
[3]Serum carcinoembryonic antigen level in surgically resected clinical stage i patients with non-small cell lung cancer[J].Noriyoshi Sawabata,Mitsunori Ohta,Shin-ichi Takeda,Hirotsugu Hirano,Yoshitomo Okumura,Hiroki Asada,Hajime Maeda.The Annals of Thoracic Surgery.2002(1)
[4]Detection of Micrometastatic Tumor Cells in pN0 Lymph Nodes of Patients With Completely Resected Nonsmall Cell Lung Cancer:Impact on Recurrence and Survival[J].Chun-Dong Gu,Toshihiro Osaki,Tsunehiro Oyama,Masaaki Inoue,Mantaro Kodate,Kazuhito Dobashi,Takeshi Oka,Kosei Yasumoto.Annals of Surgery.2002(1)
[5]黄金桔.非小细胞肺癌患者ADAM8的表达及临床意义研究[D].广州医学院,2009.