背景[1-3]
人转移因子(TF)ELISA试剂盒是采用ELISA（酶联免疫）方法，用于测定人血清、血浆及相关液体样本中转移因子(TF)的含量。
原理:人转移因子（TF）酶联免疫吸附测定试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人TF抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的TF与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人TF抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人TF抗体与结合在包被抗体上的人TF结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物（TMB），TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，TF浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中TF的浓度。
人转移因子(TF)ELISA试剂盒
样本处理及要求
1、血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2、血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3、细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤：
1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3、样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于猪、犬转移因子对犬细胞免疫影响的比较研究
提取制备了研究所需要的猪、犬TF,然后选择杂种牧羊犬作为实验犬,用MTT法检测了实验犬注射猪TF、犬TF前后不同时间的淋巴细胞增殖效果、用流式细胞术检测了T细胞亚群的动态变化。
试验获得如下结果:1.制备的猪TF、犬TF理化性质相似,制备的TF可供本研究使用。
2. 淋转试验中,探讨不同浓度犊牛血清（FCS）、淋巴细胞、植物血凝素P（PHA-P）和刀豆蛋白A（ConA）对犬淋巴细胞增殖的影响。确定了犊牛血清含量为10%,淋巴细胞浓度为5×106个/mL,用丝裂原PHA-P刺激的浓度为12.5μg/mL时,MTT法测定能够刺激犬淋巴细胞转化增殖,但t检验分析表明其促进淋巴细胞增殖的效果并不显著;当其它条件不变,所用的丝裂原为Con A时,它在浓度为0.5～2.5μg/mL范围内均可以显著刺激T细胞的增殖（P<0.05）,且在浓度为2.5μg/mL时刺激效果。
3. 同种、异种TF均可以单独刺激犬淋巴细胞增殖,但同种TF的作用效果要优于异种TF。在分别协同PHA-P和ConA刺激淋巴细胞增殖时,同种、异种TF均可以刺激T细胞发生增殖作用,只是显著增殖的范围不同。注射异种TF后,在6～10d内,犬淋巴细胞单独增殖的能力越来越强。注射了异种TF的犬,其淋巴细胞再次受到TF单独或协同丝裂原刺激时,淋巴细胞的增殖能力呈现早期（4～6d）下降趋势,后期（6d后）受到抑制的现象。
4. 同种、异种TF均可提高犬外周血淋巴细胞数量,CD4/CD8比值变化分析证实外周血增加的淋巴细胞中主要为CD4+T细胞。犬注射同种、异种转移因子后在20d内CD4+T细胞呈现持续增加的规律。同种TF促进犬外周血CD4+T细胞上升的作用优于异种TF。
结果说明,无论同种还是异种TF,均具有提高机体细胞免疫功能的效应,这为防治犬病尤其是传染病,提高犬疫苗的免疫效果提供了理论依据。
参考文献
[1]Clinical,morphological and immunological study of 13 cases of canine lymphoblastic lymphoma:comparison with the human entity[J].F.Ponce,J.P.Magnol,A.Blavier,C.Bonnefont,I.Ghernati,P.Felman,S.Buff,C.Fournel-Fleury.Comparative Clinical Pathology.2003(2)
[2]Virus Taxonomy–1999[J].C.R.Pringle.Archives of Virology.1999(2)
[3]Orally administered HSV-specific transfer factor（TF）prevents genital or labial herpes relapses[J].Giancarlo Pizza,Dimitri Viza,Caterina Vinci,Aldopaolo Palareti,Diego Cuzzocrea,Vittorio Fornarola,Roberto Baricordi.Biotherapy.1996(1)
[4]In vitro studies during long term oral administration of specific transfer factor[J].Giancarlo Pizza,Caterina Vinci,Vittorio Fornarola,Aldopaolo Palareti,Olavio Baricordi,Dimitri Viza.Biotherapy.1996(1)
[5]常建军.猪、犬转移因子对犬细胞免疫影响的比较研究[D].西北农林科技大学,2005.