背景[1-3]
NCI-H596是1983年由Gazdar·A·F和Oie·H从一名患有肺腺鳞癌的73岁白人男性患者的胸壁肿物中分离得到；肿块的获取先于治疗。NCI-H596细胞表达与正常肺组织水平相当的p53，没有大的结构DNA的异常。NCI-H596细胞角蛋白和波形蛋白阳性，神经丝三联蛋白阴性；NCI-H596细胞表达多种鳞状细胞分化标志，如谷氨酰胺转移酶活性、被膜素的产生和交联包膜的形成。
NCI-H596
NCI-H596细胞培养步骤：
1）复苏NCI-H596细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）NCI-H596细胞传代：如果NCI-H596细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察RL95-2细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打NCI-H596细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
3）NCI-H596细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。
应用[4][5]
NCI-H596可以用于扶正抑癌1号方联合吉非替尼治疗非小细胞肺癌的临床及作用机制研究
通过使用扶正抑癌1号方联合吉非替尼,分析不同实验组的肿瘤抑制效果、各类肿瘤细胞在组织中的阳性表达率以及蛋白表达水平,探索扶正抑癌1号方联合吉非替尼治疗非小细胞肺癌增效减毒的作用机制。
研究方法:1、Meta分析方面,采用统计学方法对收集的多个研究资料进行概括和分析,收集以中西医结合理论为指导,中医药联合EGFR-TKIs治疗非小细胞肺癌的随机对照临床试验,对其疾病控制率为临床疗效进行系统评价,对同一问题的多个研究结果进行系统的、定量的综合性分析,用量化的平均效果来解释研究的问题。
2、临床研究方面,采用多中心、随机、对照试验;对照组常规服用吉非替尼单药,试验组在对照组的基础上联合扶正抑癌1号方,试验结束后,以RECIST标准、Karnofsky评分、中医临床症状评分、不良反应分级标准和安全指标等指标进行综合评价,了解扶正抑癌1号方联合吉非替尼是否优于单用吉非替尼,中医药的配合应用是否有增效减毒的作用。
3、实验研究方面,裸鼠接种人肺腺鳞癌NCI-H596细胞,造模成功后进行分组灌胃给药,观察吉非替尼联合不同浓度的扶正抑癌1号方的抑瘤重量率,抑瘤体积率,应用免疫组化法检测各组裸鼠肿瘤组织的P63及TTF1的阳性表达率,用蛋白印迹实验了解各组肿瘤组织细胞P63和TTF1的蛋白表达水平,从而评估各组给药对非小细胞肺癌细胞转分化的影响,阐释扶正抑癌1号方联合吉非替尼的增效机制与非小细胞肺癌转分化的关联性。
研究结果:1、Meta分析方面。通过对21篇文献所报道的总有疗效进行研究,各文献间无统计学异质性(P=0.92,I2=0),采用固定效应模型合并效应量分析,结果显示,试验组患者的总有效率显著高于对照组,两组比较差异有统计学意义[OR=2.22,95%CI(1.75,2.81),P<0.01]。选取疾病控制率为指标绘制倒漏斗图,显示左右两侧的点估计值分布基本对称,说明不存在发表偏倚。对文献进行质量评价发现,所有文献没有提前进行估算试验样本量,这些试验对随机化的描述有限,多数研究随机分配方案是否隐藏未描述,部分研究未采用盲法,所有研究均无病例脱落标准与病例剔除标准,所纳入研究文献的质量不高,结果有夸大试验组疗效的嫌疑,可靠性降低。
参考文献
[1]MicroRNA-34a and its target genes:Key factors in cancer multidrug resistance.Morteza Ghandadi;;Amirhossein Sahebkar.Current Pharmaceutical Design,2016
[2]Identification and verification of transgelin-2 as a potential biomarker of tumor-derived lung-cancer endothelial cells by comparative proteomics.Hongwei Jin;;Xiao Cheng;;Yihua Pei;;Jianguo Fu;;Zhi Lyu;;Huifang Peng;;Qin Yao;;Yu Jiang;;Lianzhong Luo;;Huiqin Zhuo.Journal of Proteomics,2016
[3]Every Cell Is Special:Genome-wide Studies Add a New Dimension to Single-Cell Biology.Jan Philipp Junker;;Alexander van Oudenaarden.Cell,2014
[4]Cancer biomarker discovery:Current status and future perspectives.Katrin Mäbert;;Monica Cojoc;;Claudia Peitzsch;;Ina Kurth;;Serhiy Souchelnytskyi;;Anna Dubrovska.International Journal of Radiation Biology,2014
[5]孙剑峰.扶正抑癌1号方联合吉非替尼治疗非小细胞肺癌的临床及作用机制研究[D].成都中医药大学,2019.