背景[1-3]
NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系是一种常用的细胞系，用于研究肺癌的生物学特性和药物筛选。这种细胞系源自一名56岁男性的肺转移癌组织，具有非小细胞肺癌的典型特征。
NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系通常在含有优质胎牛血清、抗生素和生长因子的RPMI-1640培养基中生长。该细胞系是贴壁生长的，需要在塑料培养容器中进行培养。细胞形态通常为上皮样，呈现多边形或圆形。
在使用NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系进行实验时，需要注意以下几点：
NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系培养条件：该细胞系需要在含有一定浓度的血清、抗生素和生长因子的培养基中生长，同时需控制温度、湿度和二氧化碳浓度等条件。
NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系传代方法：NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系的传代方法通常采用胰酶消化法或胶原酶消化法，传代比例根据实验需求进行适当调整。
NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞形态：NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系的形态通常为贴壁生长，呈现圆形或卵圆形，有时可见细胞之间形成突起或形成细胞团。
NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系
NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系培养步骤：
1）复苏NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
3）NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。
应用[4-5]
NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系可以用于ERCC1基因沉默对非小细胞肺癌化疗敏感性的影响
探讨沉默ERCC1基因后顺铂、紫杉醇、培美曲塞单药或者联合用药作用对非小细胞肺癌细胞产生的影响。
方法：利用TCGA数据库中的数据,比较肺鳞癌和肺腺癌与其对应的癌旁组织中ERCC1基因的表达水平。使用RT-PCR技术筛选ERCC1高表达肺癌细胞株。构建ERCC1 siRNA慢病毒载体LV-ERCC1-siRNA1和LV-ERCC1-siRNA2,并将其转染A549细胞。Western blot技术检测细胞中ERCC1的蛋白表达水平,确认转染是否成功。为了确定ERCC1基因的表达与细胞对顺铂,紫杉醇和培美曲塞的药物敏感性之间的关系。将化疗药物顺铂,紫杉醇和培美曲塞采用单独用药或者联合用药分别处理转染慢病毒的A549细胞,并使用CCK法和集落形成实验测定细胞存活率和细胞集落形成能力。
结果：1本研究分析了TCGA数据库中535例肺腺癌和59例对应的癌旁组织中ERCC1的表达水平,结果发现,ERCC1基因在肺腺癌组织中的表达水平(中位数为2082)远远高于其在癌旁组织中的表达水平(中位数为1274),差异具有统计学意义(Z=-4.901,P=0.001)。ERCC1基因在肺鳞癌组织(502例)中的表达水平(中位数为3004)和其在癌旁组织(49例)中的表达水平(中位数为2721)没有统计学差异(Z=-1.643,P=0.100)。
2.ERCC1在三株非小细胞肺癌细胞A549、NCI-H23和NCI-H2030人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞中的相对表达量分别为0.16±0.017、0.037±0.01和0.026±0.001。可以发现,在A549细胞ERCC1 m RNA表达水平较高。
3.A549细胞转染LV-ERCC1-siRNA1和LV-ERCC1-siRNA2慢病毒后,ERCC1表达水平显著降低。
参考文献
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