背景[1-3]
EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞是一种人乳腺管癌细胞系。该细胞系在研究中常被用于了解乳腺管癌的发病机制、药物筛选和治疗效果评估等方面。
乳腺管癌是一种常见的恶性肿瘤,其发生和发展涉及到多种基因和环境的因素。通过研究EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞,科学家们可以深入了解乳腺管癌的生物学特性、细胞生长和增殖的机制,以及不同治疗方法的疗效和副作用。
为了保持细胞的活力和纯度,EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞需要在特定的培养条件下进行培养。这些条件包括适当的温度、湿度、pH值和营养物质等。同时,为了防止污染,需要在整个实验过程中采取严格的预防措施,如使用一次性耗材、定期更换培养液等。
EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞是一种重要的研究工具,有助于深入了解乳腺管癌的发病机制和治疗方法。但同时也需要严格的实验操作和管理,以保证实验结果的准确性和可靠性。
EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞
EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞培养操作
1)复苏EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3)EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞可以用于DNA启动子甲基化在脾酪氨酸激酶Syk肺癌表达中的影响
探讨人低转移肺大细胞癌(NL9980),人高转移肺大细胞癌(L9981),人肺腺癌(A549),人肺鳞癌(YTMLC-9),人肺小细胞癌(NCI-H446)5种肺癌细胞株中是否存在Syk基因启动子甲基化,探讨基因启动子甲基化对Syk的表达是否具有影响作用。
方法:体外培养人低转移肺大细胞癌细胞株(NL9980),人高转移肺大细胞癌细胞株(L9981),人肺腺癌细胞株(A549),人肺鳞癌细胞株(YTMLC-9),人肺小细胞癌细胞株(NCI-H446)5种肺癌细胞株以及Syk基因表达阳性对照EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞、Syk基因表达阴性对照人乳腺管癌细胞株(MDA-MB-435S);同时选取16例肺癌病人的肿瘤组织和相应的正常肺组织,提取其RNA,逆转录为cDNA,选取Syk基因特异性引物进行扩增,Real-time PCR观察其表达情况。甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测人低转移肺大细胞癌细胞株(NL9980),人高转移肺大细胞癌细胞株(L9981),人肺腺癌细胞株(A549),人肺鳞癌细胞株(YTMLC-9),人肺小细胞癌细胞株(NCI-H446)5种肺癌细胞株Syk基因启动子甲基化是否存在,以Syk基因启动子甲基化阳性的人乳腺管癌细胞株(MDA-MB-435S)、Syk基因启动子甲基化阴性的EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞为对照。以甲基化转移酶抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-CdR)处理后,检测处理前后Syk基因的表达变化。
结果:以Syk表达阳性对照EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞和阴性对照乳腺管癌细胞株(MDA-MB-435S)为参考,所培养的5种肺癌细胞株Syk基因表达缺失(P<0.05)。16例肺癌病人肿瘤组织与相应的正常肺组织相比Syk基因表达明显减低,具有统计学差异(P<0.05)。
参考文献
[1]Clinical significance of nuclear expression of spleen tyrosine kinase(Syk)in gastric cancer[J].Hiroshi Nakashima;;Shoji Natsugoe;;Sumiya Ishigami;;Hiroshi Okumura;;Masataka Matsumoto;;Shuichi Hokita;;Takashi Aikou.Cancer Letters,2005(1)
[2]Promoter hypermethylation and inactivation of O6-methylguanine-DNA methyltransferasein esophageal squamous cell carcinomas and its reactivation in cell lines[J].Ming Zhu Fang;;Zhe Jin;;Yimin Wang;;Jie Liao;;Guang-Yu Yang;;Li-Dong Wang;;Chung Yang.International Journal of Oncology,2005(3)
[3]Protein tyrosine kinase Syk modulates EGFR signalling in human mammary epithelial cells[J].Anja Ruschel;;Axel Ullrich.Cellular Signalling,2004(11)
[4]Role of epigenetic changes in hematological malignancies[J].Ulrich Lehmann;;Kai Brakensiek;;Hans Kreipe.Annals of Hematology,2004(3)
[5]董尚文.DNA启动子甲基化在脾酪氨酸激酶Syk肺癌表达中的影响[D].天津医科大学,2009.