背景[1-3]
Hce-8693是一种细胞系,源自一位男性盲肠未分化腺癌患者的淋巴结转移的病理切片。这种细胞系在生物学研究中被广泛用于实验和科研,尤其在癌症研究领域。
Hce-8693细胞系的倍增时间是30.4小时,有丝分裂指数是28.8%。电子显微镜检查显示其具有巨核、核仁分界明显、微丝丰富以及分泌颗粒等特征。其染色体模式数是48,在软琼脂上能形成克隆的比率为8%。此外,Hce-8693细胞在细胞中和培养液上清中CEA阳性。当这种细胞被异体移植到裸鼠时,形成的瘤与患者原病灶相同,并且在细胞质中有阿尔新蓝阳性物质。
Hce-8693
Hce-8693细胞系培养操作
1)复苏Hce-8693细胞系:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)Hce-8693细胞系传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3)Hce-8693细胞系冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
Hce-8693可以用于人参皂甙Rg3对大肠癌细胞株Hce-8693作用的实验研究
将人参皂甙Rg3分别单独、和联合肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)基因作用于大肠癌细胞株Hce-8693,来探索传统中药与现代基因联合治疗对肿瘤治疗的新途径。方法将人参皂甙Rg3作用于大肠癌细胞株Hce-8693,并联合重组腺病毒载体介导的TRAIL基因(Ad/GT-TRAIL)协同作用。通过MTT比色法与流式细胞仪研究分析其对Hce-8693细胞的作用效果。
结果单独应用浓度0.01%、0.017%、0.025%、0.05%的人参皂甙Rg3及2000MOI的Ad/GT-TRAIL对Hce-8693细胞的生长抑制率分别为8.6%、8.6%、18.7%、21.9%和24.3%;凋亡诱导率分别为5.4%、7.6%、20.3%、20.9%和23.2%。联合应用后,对Hce-8693细胞株的生长抑制率及凋亡率均有显著的增强作用,分别达17.8%、25.7%、37.3%、46.2%及18.9%、20.1%、46.2%、56.0%。人参皂甙Rg3对Hce-8693的生长抑制及促凋亡作用存在浓度依赖现象。
结论一定浓度的人参皂贰Rg3或TRAIL能有效抑制Hce-8693的生长,人参皂贰Rg3对Hce-8693的生长抑制及促凋亡作用有浓度依赖性。联合应用后,其对Hce-8693的生长抑制作用及凋亡诱导作用均明显增强,协同作用的机理值得进一步探索。
参考文献
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[3]Hypocrellins and Hypericin induced apoptosis in human tumor cells:Apossible role of hydrogen peroxide[J].Seyed Ali;;Soo Chee;;Gan Yuen;;Malini Olivo.International Journal of Molecular Medicine,2002(5)
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[5]吴彤.人参皂甙Rg3对大肠癌细胞株HCE8693作用的实验研究[D].浙江大学,2004.