背景[1-6]
大鼠肾小球内皮细胞分离自正常大鼠肾组织，肾小球内皮细胞是一类特殊微血管类型的细胞，能够调节肾小球过滤。它是组成过滤屏障内壁的重要部分，与肾小球的病理生理过程有关。肾小球内皮细胞能合成必要的生物活性分子，它的这种基本活性会在致炎和致血栓物质的刺激下慢慢增强。肾小球内皮细胞的受损显著影响着肾小球疾病的进展和修复过程。当肾小球损害严重时，内皮受损无法新生血管，硬化代替受损区域。
肾小球内皮细胞受损后不可避免地会影响系膜细胞和上皮细胞并有可能通过它们的相互作用改变肾病的进展。肾小球内皮细胞是肾小球固有细胞之一，也是构成肾单位的重要组成部分。肾小球内皮细胞能够调节肾小球滤过功能，是滤过屏障内壁的重要组成部分，与肾小球的病理生理过程相关。肾小球是包裹在肾小囊内的一团卷曲的毛细血管，肾小球结构复杂而独特，其固有细胞包括肾小球内皮细胞、系膜细胞和上皮细胞，它们相互之间结构与功能联系密切，相互关联。在大鼠肾小球中，内皮细胞、系膜细胞和上皮细胞3种细胞的数量比为3:2:1。大鼠肾小球内皮细胞，采用胶原酶消化制备而来。大鼠肾小球内皮细胞传5代以上仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。
应用[7][8]
用于血管紧张素Ⅱ对大鼠肾小球内皮细胞炎性因子MCP-1表达和增殖、凋亡的影响及其AT1受体拮抗剂替米沙坦作用的研究
肾内肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）的局部激活是多种慢性肾脏病变发生发展过程中的主要特点,血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）作为该系统的效应因子在机体血容量、血流动力学及内环境稳态的调节中发挥主导作用。已有研究表明肾内局部升高的AngⅡ水平与高血压、糖尿病时肾脏病变的发生发展关系密切。研究发现肾内局部升高的AngⅡ不仅可以导致球内高压,同时还具有生长因子和炎症因子的作用,致使肾小球发生硬化病变。肾小球内皮细胞（GlomerularEndothelial Cells,GECs）又称肾脏微血管内皮细胞,是肾小球滤过屏障的重要组成部分,承受着远高于一般毛细血管的血压,是血液内的致病因子以及血液动力学变化易损伤的靶细胞,受损激活后可分泌单核细胞趋化因子（monocytechemoattractant protein-1,MCP-1）等多种炎症因子。
目前有关AngⅡ是否会诱导肾小球内皮细胞发生炎症反应及其对增殖和凋亡作用方面的研究,尚未见报道。血管活性肽AngⅡ可激活多条细胞内信号通路,刺激细胞内活性氧基团（reactive oxygen species,ROS）的生成。细胞内ROS的主要来源是通过还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶系统的活化,使活性氧基团ROS生成增加。p47phox蛋白是NADPH氧化酶的亚基,对NADPH氧化酶的活化起到重要作用。ROS作为极其重要的细胞内信使,与多条信号通路的活化相关。核因子-κB（Nuclear factor-κB,NF-κB）的活化,可上调多种相关炎性因子的表达。p38MAPK信号通路的激活,不仅在炎症、应激反应中具有重要作用,还参与细胞的存活、分化和凋亡等过程。AngⅡ的作用主要通过AT1和AT2两种类型受体所介导,在成人肾脏组织中,AT1受体分布广泛,而AT2受体分布很少。AngⅡ在心血管系统中的作用主要通过AT1受体介导。
目前有关AngⅡ对血管内皮细胞结构和功能影响的研究愈来愈受到重视,本实验主要从炎症、增殖和凋亡方面探讨AngⅡ对大鼠肾小球内皮细胞的作用及其相关机制,以及AT1受体拮抗剂替米沙坦对其作用的影响。实验方法1、大鼠肾小球内皮细胞的分离培养与鉴定SD胎大鼠（20-30g）无菌条件下取双肾,剥去被膜,眼科剪剪下肾皮质部分于培养皿中,剪碎后经尼龙筛网滤过,采用胰蛋白酶消化法进行原代细胞培养。第3-5代细胞用于实验。细胞的鉴定采用形态学观察法和免疫荧光法检测第Ⅷ因子相关抗原。
参考文献
[1]Urinary TGF-β1 as an indicator of antiproteinuric response to angiotensin II receptor blocker in proteinuric renal diseases[J].Hyeong Cheon Park,Hoon Young Choi,Beom Seok Kim,Hye Rim An,Jae Sung Lee,Sung Kyu Ha,Dae Suk Han.Biomedicine&Pharmacotherapy.2009(9)
[2]Vascular and inflammatory stresses mediate atherosclerosis via RAGE and its ligands in apoE^sup-/-^mice[J].Harja,Evis,Bu,De-xiu,Hudson,Barry I,Chang,Jong Sun,Shen,Xiaoping,Hallam,Kellie,Kalea,Anastasia Z,Lu,Yan,Rosario,Rosa H,Oruganti,Sai,Nikolla,Zana,Belov,Dmitri,Lalla,Evanthia,Ramasamy,Ravichandran,Yan,Shi Fang,Schmidt,Ann Marie.Journal of Clinical Investigation.2008(1)
[3]Mechanism of High Glucose–Induced Angiotensin II Production in Rat Vascular Smooth Muscle Cells[J].Eduard N.Lavrentyev,Anne M.Estes,Kafait U.Malik.Circulation Research.2007(5)
[4]Pathophysiological regulation of the AT1-receptor and implications for vascular disease[J].Sven Wassmann,Georg Nickenig.Journal of Hypertension.2006
[5]Antiproteinuric effect of RAS blockade:New mechanisms[J].Markus Lassila,Mark E.Cooper,Karin Jandeleit-Dahm.Current Hypertension Reports.2004(5)
[6]Angiotensin II and Nitric Oxide Interaction[J].Marc de Gasparo.Heart Failure Reviews.2002(4)
[7]Cyclosporin A Inhibits Apoptosis of Human Endothelial Cells by Preventing Release of Cytochrome C From Mitochondria[J].Dirk H.Walter,Judith Haendeler,Jan Galle,Andreas M.Zeiher,Stefanie Dimmeler.Circulation.1998(12)
[8]潘茜.血管紧张素Ⅱ对大鼠肾小球内皮细胞炎性因子MCP-1表达和增殖、凋亡的影响及其AT_1受体拮抗剂替米沙坦作用的研究[D].中国医科大学,2009.