背景[1-3]
17Β-雌二醇(17Β-ESTRADIOL)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中17Β-雌二醇(17Β-ESTRADIOL)水平。
实验原理
17Β-雌二醇(17Β-ESTRADIOL)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被17Β-雌二醇(17Β-ESTRADIOL)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的17Β-雌二醇(17Β-ESTRADIOL)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
17Β-雌二醇(17Β-ESTRADIOL)ELISA试剂盒
样本处理及要求
1.血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2.血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3.组织匀浆:用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于生物炭对鸡粪堆肥过程中17β-雌二醇降解和生物活性的影响研究
天然雌激素中17β-雌二醇(E2)的生物活性最强,粪便中E2的迁移会对人类健康和鱼类繁殖构成潜在威胁。好氧堆肥处理可以使畜禽粪便中一部分E2被微生物降解,但粪便中仍有E2残留。近年来,生物炭作为一种好氧堆肥的添加剂虽被广泛使用,然而目前关于生物炭对畜禽粪便堆肥过程中E2降解和生物活性的影响的研究较少,能否利用生物炭去除畜禽粪便中E2并削弱雌激素生物效应仍需进一步研究。
因此,研究开展两组堆肥试验,一组为鸡粪-玉米秸秆堆肥体系,另一组为鸡粪-玉米秸秆-蘑菇渣堆肥体系,以不添加生物炭的处理为对照(分别为Control1和Control2),通过向堆肥物料中添加5%、10%和15%(鸡粪干重占比)的小麦秸秆生物炭和稻壳生物炭来研究堆体的理化性质变化、E2降解情况、雌激素对人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)的增殖效应及其影响机制。
主要研究结果如下:1.添加5%、10%、15%的小麦秸秆生物炭和稻壳生物炭均能促进堆体碳氮比(C/N)的下降并减少堆体中氨气(NH3)的排放。在鸡粪-玉米秸秆堆肥体系和鸡粪-玉米秸秆-蘑菇渣堆肥体系中,添加两种生物炭的堆体的C/N减少量达6.59~9.26,高于相应对照;与Control1和Control2相比,添加两种生物炭可使堆体平均每天排放的NH3浓度降低13.71%~89.34%,且相同添加比例下使用比表面积和孔容更大的稻壳生物炭对NH3挥发的抑制作用更强,可以得出添加15%的稻壳生物炭更有利于抑制堆体中NH3的排放。
2. 生物炭的添加促进堆体中E2的降解,当小麦秸秆生物炭和稻壳生物炭的添加比例为15%时,堆体中E2浓度下降的比例。堆肥期间,鸡粪-玉米秸秆堆肥体系中添加两种生物炭的堆体的E2含量降低了70.72%~78.04%,高于Control1的下降比例(69.64%);鸡粪-玉米秸秆-蘑菇渣堆肥体系中添加两种生物炭的堆体的E2含量降低了73.52%~88.08%,高于Control2的下降比例(67.76%)。
3.生物炭的添加促进堆体中三种E2降解菌(Bacillus licheniformis、Bacillus subtilis、Rhodococcus equi)的生长。在鸡粪-玉米秸秆堆肥体系和鸡粪-玉米秸秆-蘑菇渣堆肥体系中,添加两种生物炭能够显著(p<0.05)增加三种E2降解菌的总相对丰度。当生物炭添加比例相同时,使用稻壳生物炭的堆体中三种E2降解菌的总相对丰度高于使用小麦秸秆生物炭的堆体中三种E2降解菌的总相对丰度。
参考文献
[1]Influence of biochar on physico-chemical and microbial community during swine manure composting process[J].Balasubramani Ravindran,Dinh Duc Nguyen,Dhiraj Kumar Chaudhary,Soon Woong Chang,Jaisoo Kim,Sang Ryong Lee,JoungDu Shin,Byong-Hun Jeon,SeokJoo Chung,JaeJoung Lee.Journal of Environmental Management.2019
[2]Effects of biochar size and type on gaseous emissions during pig manure/wheat straw aerobic composting:Insights into multivariate-microscale characterization and microbial mechanism[J].Xueqin He,Hongjie Yin,Lujia Han,Ruxiu Cui,Chen Fang,Guangqun Huang.Bioresource Technology.2018
[3]Estrogen:The necessary evil for human health,and ways to tame it[J].Seema Patel,Ahmad Homaei,Akondi Butchi Raju,Biswa Ranjan Meher.Biomedicine&Pharmacotherapy.2018
[4]Combining biochar,zeolite and wood vinegar for composting of pig manure:The effect on greenhouse gas emission and nitrogen conservation[J].Quan Wang,Mukesh Kumar Awasthi,Xiuna Ren,Junchao Zhao,Ronghua Li,Zhen Wang,Meijing Wang,Hongyu Chen,Zengqiang Zhang.Waste Management.2018
[5]荣荣.生物炭对鸡粪堆肥过程中17β-雌二醇降解和生物活性的影响研究[D].海南大学,2019.